果树苗木微体嫁接脱毒技术

果树苗木微体嫁接脱毒技术
1.培育无病毒植株

微体嫁接是果树苗木获得无病毒苗木的方法之一。我国苏琴 环等（1980)以金冠苹果实生苗作砧木，以格瑞弗斯苹果 茎尖分生组织作接穗进行试管嫁接，获得无苹果茎沟病毒的 苹果植株。

进行嫁接亲和力的研究

在人工控制的条件下，通过试管微体嫁接有助于进行砧 穗亲和力的研究。具有亲和力的接穗和砧木在嫁接时，愈和 的第一步是形成愈伤组织，很多研究者在进行试管微体嫁接 条件下，对各种砧木和接穗之间的亲和力进行了研究，筛选 出亲和力强的砧穗组合。

解决营养繁殖生根难的问题

某些营养繁殖难以生根的植物种类或品种，可以借助于 试管微体嫁接的方法，解决生根难的问题。例如格瑞弗斯苹 果通过茎尖组织培养，可以获得无病毒新梢，但不能生根， 只有通过嫁接才能获得完整植株。

(二）微体嫁接的方法

以金冠品种苹果实生苗作砧木，用MSA和MSB两种培 养基。河5八是含0.8*琼脂的固体培养基，供胚发芽用； MSB是液体培养基含有MS’无机盐和维生素Bp添加7% 的蔗糖？11值为5.7，供接穗茎尖的分生组织生长用。将经 过低温层积处理的种子去掉种皮，用0.5^次氯酸钠（含氯 10%)消毒1011^1，然后用无菌蒸馏水冲洗3次，接种于 ”5八培养基中，在25^黑暗条件下培养15天。然后将幼苗 的上胚轴和子叶去掉，移入平底试管（2.5cmxllcm)中， 试管内带一个中心有小孔的滤纸桥，将茎尖分生组织放在砧 木的下胚轴上，并与其维管组织密接。茎尖分生组织接穗, 可取自试管培养的新梢，也可以从田间取无菌新梢。嫁接后 将其置于每天161 4 000匕光照、27尤的温度和811黑暗、 231条件下培养。

接种1周后接穗和砧木均产生愈伤组织并完全愈合，6 -50 –

周后接穗发育成具有4〜6叶片的新梢。这时即可移入无菌 的珍珠岩中，灌入肘58培养液，并盖以烧杯保持湿度。移 栽后64内，每天将烧杯口从一边提高0.5(^，第七天去掉 烧杯，再经过2天即可将幼苗移入消毒的土壤中，并放入温 室内生长。

(三）影响微体嫁接成活的因素

影响微体嫁接成活的因素主要是接穗的大小和取样的时 间。试管内嫁接成活的可能性与接穗的大小成正相关，而无 病毒植株的培育与接穗茎尖的大小成负相关。所以，为了获 得无病毒植株，可以采用有2个叶原基的茎尖分生组织作接 穗。一年中不同时期从田间取样作接穗嫁接的成活率也不 同。从11月份到3月份期间进行嫁接，成活率为10^; 5 月份进行嫁接成活率为70%，6〜10月份嫁接则每个月下降 10^。在采用离体培养的茎尖新梢作接穗时，成活率为 60*而与月份无关。

微体嫁接技术难度较大，不容易掌握，与实际应用还有 相当距离。但是，随着对无病毒苗木需要量的不断增加，预 计在不久的将来，微体嫁接技术像茎尖分生组织培养一样， 将会有很大的发展。

六、抗病毒醚在果树苗木脱毒中的应用

抗病毒醚（Ribaririn)是一种对0\人或1^人具有广谱 作用的人工合成核苷物质。近年来的研究表明，在茎尖培养 和原生质体培养中，在培养基内加入抗病毒醚，能抑制病毒 复制，从感染病毒的分生组织可获得无病毒马铃薯苗。用木 本植物也进行了一些试验，脱除的果树苗木病毒有葡萄扇叶病毒、苹果褪绿叶、斑病毒等。

山家弘士（1986)为了探讨抗病毒醚对脱除苹果茎沟 病毒的效果，用加有抗病毒醚的培养基，对感染苹果茎沟病 毒的试管苗进行培养。抗病毒醚的浓度为12.5pgAnU 25.0jjLg/ml,分别加入标准培养基（MS’ BA)中，然后高 压灭菌15mi&处理时间为401 80d和120d,结果表明， 25.0^#1^处理的试管苗稍有黄化，新梢增殖数减少，时间 越长，枯死的个体也越多；但12.5^^1^处理未观察到明 显药害。在抗病毒醚残效已经消失的200(1和2404后，检测 苹果茎沟病毒的结果表明，加用抗病毒醚的培养基，继代培 养80(1以上的试管苗，不管抗病毒醚浓度高低都脱除了病 毒。抗病毒醚对苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎沟病毒，在苹果 体内都有抑制增殖效果。在加用抗病毒醚培养基中增殖的新 梢，其顶端部分在继代培养过程中，逐渐脱除了病毒。其原 因是抗病毒醚作用于寄主的代谢方式，从而阻止病毒的 增殖。

丑虹1&3等在木本植物茎尖培养中曾使用抗病毒醚代替 热处理，结果脱除了葡萄扇叶病毒。汉森等进行苹果茎尖培 养时，用抗病毒醚抑制了苹果褪绿叶斑病毒。抗病毒醚浓度 为10Jxg/ml或20^^g/ml，2个月能有效地脱除所有枝条的苹 果褪绿叶斑病毒。在此浓度下枝条生长未减少，仅偶尔有轻 微褪绿。用80^#1^抗病毒醚处理的所有枝条呈中毒现象， 而用40^8^^处理的枝条则表现轻微中毒。在生育期间喷 布抗病毒醚，可在苗木顶端部分，扩大无毒区域。

对于抗病毒醚的应用效果，因病毒种类不同而有差异。 目前用此法脱除所有病毒，也是不可能的，在不久的将来， 如能开发出抗病毒的多种制剂，将为脱除病毒，提高无病毒 种苗的生产效率做出积极贡献。